La première réponse à cette question est d'utiliser la technique des répliques (fiche23) :

On prépare quelques centaines de boîtes contenant du milieu additionné d'un produit complet, compensant le défaut du mutant puis on effectue une réplique sur un milieu minimum. Une colonie mutante ne se développera pas sur la boîte réplique ce qui permettra de la repérer.

Tout à fait efficace en théorie, cette démarche est lourde en pratique, puisqu'elle conduit à réaliser non seulement quelques centaines de boîtes mères mais autant de répliques, chacune supposant de plus l'utilisation d'un disque de velours. Là encore, une astuce technique a permis de travailler plus efficacement.

La cyclohéximide est un produit qui tue les levures qui se multiplient. On se sert de cette propriété de la manière suivante: une culture de levures ayant subi un traitement mutagène est mis en présence de cyclohéximide pendant la phase de multiplication, en milieu minimum: 99% des cellules de référence, prototrophes, sont tuées. Par contre, les cellules auxotrophes ne le sont pas, puisqu'elles ne peuvent pas se multiplier. Après une ou deux heures (et autant de divisions cellulaires), on interrompt le traitement ().

On étale sur un milieu contenant le produit permettant la compensation d 'un éventuel mutant auxotrophe puis on utilise le processus classique des répliques pour repérer les colonies mutantes (figure1).