L’objectif de cette étape est d’estimer la quantité de fragment amplifié. Pour cela vous disposez de deux techniques: Electrophorèse avec un gel étalonné par des marqueurs de taille (témoins) ou dosage par spectrophotométrie.

Les données de départ sont les suivantes :
Pour réaliser la PCR (volume total de la réaction 50 µl), nous sommes partis d’un échantillon d’ADN matrice à 500 ng/µl et nous avons utilisé 100 ng d’ADN matrice.

Calculez quel volume d'ADN matrice a été utilisé? Réponse.

Pourquoi faut-il diluer la solution d'origine d'ADN matrice? Réponse.

On réalise 25 cycles d’amplification successifs.

A l’issue de la PCR, on dispose d’un fragment d’ADN amplifié dont on va doser la concentration au moyen de 2 méthodes.

Indiquez pour chacune des deux techniques:
Quelles sont succinctement les principes du dosage de l’ADN?
Les étapes du calcul de la concentration de l’échantillon dosé?
La quantité d’ADN récupérée après la PCR?

N’oubliez pas de noter soigneusement toutes vos réponses sur votre cahier d’expérience.

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Document modifié le 17 juillet, 2017