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Les outils
de
génétique
moléculaire |
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Les outils de génétique
moléculaire
Les techniques liées aux acides nucléiques
Détection, caractérisation et identification des acides nucléiques
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Hybridation moléculaire
L'hybridation moléculaire désigne l'association qui
peut avoir lieu entre deux acides nucléiques simples brins
de séquences complémentaires et qui conduit à
la formation d'un double brin ou duplex. Cette association s'effectue
par l'établissement de liaisons hydrogènes spécifiques
: deux liaisons entre l'adénine (A) et la thymine (T) (ou
l'uracile U) et trois entre la cytosine (C) et la guanine (G). La
formation et la stabilité des duplex dépendent de
nombreux facteurs en plus de la composition en bases : longueur
des duplex, complexité de la séquence.
L'hybridation est à la base de nombreuses techniques de biologie
moléculaire impliquant la mise en présence d'au moins
deux brins simples d'acides nucléiques dans des conditions
physico chimiques précises. Le brin, dont on connaît
au moins une partie de la séquence, est une sonde, l'autre
brin, celui que l'on souhaite caractériser constitue la cible.
L'un des deux brins est marqué par couplage chimique avec
une molécule pouvant générer un signal.
Les sondes nucléotidiques (1/2)
Définition
Une sonde nucléotidique est un segment de nucléotides
qui permet de rechercher de manière spécifique un
fragment d'acide nucléique que l'on désire étudier.
Cette réaction sonde-fragment correspond à une réaction
d'hybridation moléculaire.
Caractéristiques générales
Une sonde nucléotidique peut être une séquence
d'ADN ou d'ARN, mais obligatoirement monobrin. Sa taille est très
variable : oligonucléotide de 20-30 nucléotides ou
à l'opposé de plusieurs centaines de nucléotides.
La sonde est complémentaire et antiparallèle du fragment
recherché. Dans un mélange complexe où s'effectue
l'hybridation moléculaire, la sonde doit être facilement
repérable grâce à un marquage avec un radioisotope
(marquage chaud), mais il existe également des sondes appelées
sondes froides sans marquage par un radioisotope.
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