fiche expérimentale

Thème 4: les mutations

Fiche 25: Quels sont les différents types de mutants et comment les sélectionner ?

Les mutants présentant un caractère avantageux dans un milieu donné sont faciles à isoler. Dans la fiche24, nous avons étudié des mutants de levure très faciles à repérer. En effet, les conditions de milieu qui les révèlent éliminent la très grande majorité des individus: seuls les mutants subsistent. Dans le jargon du laboratoire on parle de crible positif. De manière pratique notons qu'il suffit d'étaler environ 10 ⁵cellules d'une culture ayant subi l'action d'un mutagène sur une seule boite de pétri pour obtenir plusieurs colonies résistantes chez la levure.
Pour les mutants à caractère visible, ils peuvent être isolés en observant un grand nombre d'individus. Il existe par exemple chez la levure des mutants dont les colonies sont rouges sur un milieu complet . Si on veut les isoler, il faut évidemment que les colonies soient suffisamment séparées les unes des autres, ce qui est le cas lorsqu'elles sont une centaine par boîte. Il est donc nécessaire d'observer un grand nombre de boîtes pour avoir une chance d'observer une colonie mutante après mutagénèse, en faisant l'hypothèse que la fréquence de mutants « rouges » est la même (10^-4) que celle que nous avons observée pour la résistance à la canavanine (

).
Enfin, chez la levure, un caractère mutant défavorable sur milieu minimum peut être utilisé pour procéder à un enrichissement en mutants compensables auxotrophes. Ces mutants présentent la particularité de ne pas se multiplier sur un milieu minimum, mais de pouvoir le faire, à la seule condition que le milieu minimum soit additionné de un ou de plusieurs produits. Ces mutants sont appelés auxotrophes, par opposition à la souche de référence qualifiée de prototrophe (

). On dit qu'ils sont compensables puisque leur différence peut être effacée par une simple modification de la composition du milieu minimum. Comment repérer de tels mutants, dont le caractère est négatif par rapport aux cellules de la souche de référence ?